Protoplastos foram formados a partir de esporos da amostra selvagem de Streptomyces clavuligerus durante a fase lag, exponencial e estacionária de crescimento, utilizando glicina a 0.5% como meio de cultura. Os protoplastos foram obtidos pelo tratamento das células com lisozima (EC-3.2.1.17) 40.000 U (1mg/mL) em solução osmótica de sorbitol e TES, por 90 min a 28ºC. A freqüência de protoplastos regenerados na fase lag foi de 1,7x10³ UFC/mL (28,97%), no início da fase exponencial correspondeu a 0,4x10² UFC/mL (31,67%), no final da fase exponencial observou-se 2,5x10³ UFC/mL (46,30%) e para a fase estacionária de crescimento apresentou 1,0x10(5) UFC/mL (48,45%). A produção do antibiótico e a atividade antibiótica dos protoplastos regenerados foram observadas em todas as fases de crescimento, exceto na fase lag. As técnicas de formação de protoplastos e regeneração resultaram em uma nova linhagem de Streptomyces clavuligerus produzindo 2,5 vezes mais ácido clavulânico.
Protoplasts of the wild type Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 (ATCC 27064) were formed from spores cultures obtained in the lag, exponential and stationary growth phases by using 0.5% glycine in the culture medium. The protoplasts were obtained by treatment of the cells with lysozyme (EC-3.2.1.17) 40,000 U (1mg/mL), in an osmotic solution for 90 min at 28ºC. The frequency of regenerated protoplasts in the lag phase was 1.7x10³ CFU/mL (28.97%), in the beginning of the exponential phase 0.4x10² CFU/mL (31.67%), in the exponential growth phase 2.5x10³ CFU/mL (46.30%) and 1.0x10(5) CFU/mL in stationary phase (48.45%). Antibiotic production and activity of regenerated protoplasts were observed in all phases, except in the lag phase. The protoplast formation and regeneration techniques resulted in a new isolate strain of Streptomyces clavuligerus that produced approximately 2.5 fold more clavulanic acid.